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蜂蜜中氯霉素的檢測(cè)說(shuō)明

更新時(shí)間:2014-06-09      點(diǎn)擊次數(shù):4819

  目前的氯霉素等抗生素快速檢測(cè),主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析法。
  膠體金法的特點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)單,無(wú)需實(shí)驗(yàn)室器材和專(zhuān)業(yè)的操作人員,前處理簡(jiǎn)單,結(jié)果直觀,常溫保存。國(guó)內(nèi)有很多的廠家均有生產(chǎn),比如上??祆`,北京六角體等。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于國(guó)內(nèi)各大企業(yè)。
  膠體金法只需將處理好的樣品加入稀釋液,攪拌均勻,將混合好的檢測(cè)液滴入檢測(cè)卡中,5~10分鐘即可根據(jù)卡上的出線情況判讀結(jié)果。
  ELISA法反應(yīng)原理 
  主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的基本原理來(lái)進(jìn)行的。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中,樣品中氯霉素含量越多,反應(yīng)呈色就越淡。反之,樣品中氯霉素含量越少,則呈色越深。 
  試劑盒組成 
  1、微量測(cè)試孔:每條8孔,每板12條 
  2、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液: 
  0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶 
  3、10倍濃縮萃取稀釋液:一瓶,30ml/瓶 
  4、10倍濃縮洗滌液:一瓶,30 ml /瓶 
  5、氯霉素酶標(biāo)記物: 一瓶,8 ml/瓶 
  6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶 
  7、反應(yīng)終止液:一瓶,13 ml/瓶 
  使用說(shuō)明 
  A、注意事項(xiàng) 
  1、使用前先將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液6瓶,濃縮萃取稀釋液,濃縮洗滌液,酶標(biāo)記物,底物溶液及微量測(cè)試孔條置于室溫下,回溫30分鐘。 
  2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配制 
  用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1: 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。 
  3、回溫后,取出所需微量測(cè)試孔條,將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好,置于4o℃保存。 
  B、樣品制備 
  1.待測(cè)物為生乳,則依以下方法進(jìn)行處理 (5倍稀釋) 
  取100ul待測(cè)生乳加入400ul萃取稀釋液,振蕩混合后備用。 
  2.待測(cè)物為蜂蜜,則依以下方法進(jìn)行處理 
  a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中,震蕩約5分鐘,使其充分混合均勻。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮?dú)獯蹈?溫度請(qǐng)勿超過(guò)50oC)。 
  c.加入0.5ml萃取稀釋液,震蕩約10秒鐘后備用。 
  3. 待測(cè)物為血清、則依以下方法進(jìn)行處理 
  a.抽取待檢動(dòng)物血液,離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用,注意不要有溶血。 
  b.將3ml血清加入離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震蕩混合約30秒。 
  c.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮?dú)獯蹈伞?nbsp;
  d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后,再加入1 ml萃取稀釋液,震蕩約30秒鐘。 
  e. 離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  f.若有乳化現(xiàn)象,請(qǐng)先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  4. 待測(cè)物為雞肉或魚(yú)、蝦,則依以下方法進(jìn)行處理 
  a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,并以均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約1分鐘,再震蕩約30秒。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮?dú)獯蹈伞?nbsp;
  c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml,先將殘余物*溶解后(若未能*溶解,可能會(huì)導(dǎo)致回收率降低),再加入1 ml萃取稀釋液,震蕩約30秒鐘。 
  d.離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  e.若有乳化現(xiàn)象,請(qǐng)先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。待測(cè)物為血清、則依以下方法進(jìn)行處理 
  5.待測(cè)物為內(nèi)臟(肝、心等),則依以下方法進(jìn)行處理(5倍稀釋) 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。 
  6.待測(cè)物為飼料,則依以下方法進(jìn)行處理(10倍稀釋) 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。 
  C、操作步驟 
  本產(chǎn)品的酶標(biāo)記物與氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液均直接使用,無(wú)需再稀釋。 
  1、于適當(dāng)微孔中分別加入100mL標(biāo)準(zhǔn)溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。 
  2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。 
  3、再于每一微孔中另再加入50mL酶標(biāo)記物。 
  4、輕敲盤(pán)子四周,使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1小時(shí)。 
  5、將微孔中的反應(yīng)液甩掉,再將洗液加滿(mǎn)每一微孔后甩掉,重復(fù)洗3次。 
  6、zui后一次甩掉后,在吸水紙上拍干。 
  7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,輕敲盤(pán)子四周,使其充分混合。 
  8、于室溫下避光靜置溫育20分鐘。 
  9、于每一微孔中加入100mL反應(yīng)終止液。 
  10、用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)450nm下判讀。 
  D、判定 
  1. 計(jì)算B/B0值。用樣品或標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值(B)除以零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值(B0)再乘以100%。 
  2. 以B/B0值為縱坐標(biāo),以標(biāo)樣濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo),做標(biāo)準(zhǔn)半對(duì)數(shù)曲線。 
  3. 根據(jù)每個(gè)樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對(duì)應(yīng)樣品的濃度。 
  4. 由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋?zhuān)虼烁鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。 
  E、標(biāo)準(zhǔn)曲線 
  F、靈敏度 
  氯霉素試劑檢測(cè)盒的平均檢測(cè)下限為 0.05ppb,此濃度之吸光值與陰性標(biāo)準(zhǔn)溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。 
  G、 特異性 
  針對(duì)以下抗生素進(jìn)行交叉反應(yīng)之測(cè)試,結(jié)果如下: 
  Chloramphenicol =100% 
  Chloramphenicol(free base) <0.1% 
  Gentamycin <0.1% 
  Tetracycline <0.1% 
  Penicillin G <0.1% 
  Sulfamethazine <0.1% 
  H、再現(xiàn)性 
  針對(duì)氯霉素檢測(cè)試劑盒精密度測(cè)試,重復(fù)6次,所得不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值變異系數(shù)(%CV).
  I、回收率 
  生乳(添加1.0ppb)104~117% 
  蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 
  蝦及魚(yú)肉(添加0.5ppb)95~110% 
  雞肉(添加0.5ppb) 90~120% 
  血清(添加0.5ppb)100~120% 
  內(nèi)臟(添加1.0ppb) 100~120% 
  飼料(添加2.0ppb)80~110% 
  氯霉素檢測(cè)試劑盒 
  簡(jiǎn)介 
  氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),目前已被普遍應(yīng)用于各類(lèi)家禽、家畜、水產(chǎn)品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴(yán)重的副作用,它會(huì)抑制人體骨髓的造血功能,從而引起再生障礙性貧血和粒細(xì)胞缺乏癥。目前,我國(guó)已禁止其使用。 
  簡(jiǎn)化了樣品處理方式,使用簡(jiǎn)便,省時(shí)省力省錢(qián),整個(gè)操作過(guò)程不到90分鐘。本產(chǎn)品檢測(cè)范圍廣(雞肉、魚(yú)、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等),回收率為80%-120%,靈敏度可達(dá)到0.05ppb. 
  簡(jiǎn)單 
  1. 樣品提取方便快捷。 
  2. 90分鐘得到結(jié)果。 
  3. 只需基本的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。 
  4. 操作人員只需zui基本的實(shí)驗(yàn)知識(shí)。 
  準(zhǔn)確 
  1. 結(jié)果重現(xiàn)性高。 
  2. 至0.05ppb。 
  3. 與其它抗體的交叉反應(yīng)率極低。 
  產(chǎn)品規(guī)格 
  包裝:每包96孔 
  靈敏度: 0.05ppb 
  測(cè)試區(qū)間:0.05ppb-4.05ppb 
  檢測(cè)時(shí)間:80分鐘(提取后) 
  儲(chǔ)存條件:2-8℃
  氯霉素快速檢測(cè)試紙(48條/盒) 型號(hào):DP1 
  氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn),目前已被普遍應(yīng)用于各類(lèi)家禽、家畜、水產(chǎn)品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴(yán)重的副作用,它會(huì)抑制人體骨髓的造血功能,從而引起再生障礙性貧血和粒細(xì)胞缺乏癥。目前,我國(guó)已禁止其使用。 
  氯霉素檢測(cè)試紙,簡(jiǎn)化了樣品處理方式,使用簡(jiǎn)便,,整個(gè)操作過(guò)程只須15分鐘。靈敏度可達(dá)到3ppb
  其原理為:在試劑片的 ‘中央判讀區(qū)’噴有2條隱形的線,上面一條為對(duì)照線(C線),下面一條為測(cè)試線(T線)。若樣品中氯霉素的濃度小于3ppb,則T線呈色與C線相近;若樣品中氯霉素的濃度大于3ppb,則T線將比C線淺很多或*看不到線,也就是說(shuō),氯霉素濃度越高T線越淺。 
  簡(jiǎn)單:
  1. 成套的裝置,提供準(zhǔn)確一致的可視的結(jié)果
  2. 適于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。15分鐘得到結(jié)果。
  3. 操作人員只需zui基本的化驗(yàn)知識(shí)。
  準(zhǔn)確:
  1. 結(jié)果重現(xiàn)性高。
  2. 至3ppb。
  3. 與其它抗體的交叉反應(yīng)率極低 
  
  我們?yōu)橛脩?hù)提供zui方便、快捷、周到的服務(wù)。 
  產(chǎn)品規(guī)格
  包裝:每包16片
  靈敏度: 3ppb
  檢測(cè)時(shí)間:15分鐘(提取后)
  儲(chǔ)存條件:2-8℃ 
  組成 
  本試紙組可進(jìn)行16次實(shí)驗(yàn) 
  1、反應(yīng)孔:2條16孔
  2、氯霉素指示劑:1瓶 
  3、檢測(cè)試紙片一筒 :16片 
  4、小吸管:24支 
  5、樣品混合棒:20根 
  6、10倍濃縮稀釋緩沖液:1瓶 
  試紙使用說(shuō)明: 
  A、注意事項(xiàng) 
  1、 試紙需要干燥保存,請(qǐng)隨時(shí)確保瓶蓋蓋嚴(yán) 
  2、 測(cè)試環(huán)境溫度>20℃即可。 
  3、盡量不要觸摸試紙片中央在白色膜面。 
  4、本試紙使用前,需先將整套組成部分在室溫中回溫30分鐘,以確保反應(yīng)的正確性。 
  5、檢測(cè)一個(gè)樣品使用一個(gè)反應(yīng)孔,一片測(cè)試片及一支滴管。未用完的氯霉素指示劑,可放回4℃冰箱留待下次再用。未用過(guò)的微量測(cè)試孔,隔次仍可使用。 
  6、結(jié)塊或發(fā)臭的牛奶不適合檢測(cè)。 
  7、原倍稀釋緩沖液配制:用蒸餾水將10倍濃縮稀釋緩沖液以1:9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品稀釋液。 
  B、樣品制備: 1.待測(cè)物為牛奶可直接進(jìn)行檢測(cè)。 
  2.待測(cè)物為蜂蜜,則依以下方法進(jìn)行處理: 
  以金屬勺取少量待測(cè)蜂蜜樣品置于火上加熱至沸騰,用小細(xì)管趁熱吸取樣品(勿吸入氣泡),以稀釋緩沖液做1:3稀釋。 
  3. 待測(cè)物為血清、則依以下方法進(jìn)行處理: 
  a.抽取待驗(yàn)動(dòng)物血液,離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用,注意不要有溶血。 
  b將3ml血清加入離心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,震蕩混合約30秒。 
  c.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮?dú)獯蹈伞?nbsp;
  d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后,再加入1 ml 稀釋緩沖液,震蕩約30秒鐘。 
  e. 離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  f.若有乳化現(xiàn)象,請(qǐng)先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  4. 待測(cè)物為雞肉或魚(yú)、蝦,則依以下方法進(jìn)行處理: 
  a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,并以均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約1分鐘,再震蕩約30秒。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮?dú)獯蹈伞?nbsp;
  c.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后(若未能*溶解,可能會(huì)導(dǎo)致回收率降低),再加入1ml稀釋緩沖液,震蕩約30秒鐘。 
  d.離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  e.若有乳化現(xiàn)象,請(qǐng)先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  5.待測(cè)物為內(nèi)臟(肝、心等),則依以下方法進(jìn)行處理(5倍稀釋): 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以稀釋緩沖液稀釋5倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液400ul)。 
  6.待測(cè)物為飼料,則依以下方法進(jìn)行處理(10倍稀釋): 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以稀釋緩沖液稀釋10倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液900ul)。 
  C、操作步驟: 
  (若樣品不只一份,請(qǐng)先為樣品及反應(yīng)孔做好對(duì)應(yīng)編號(hào)) 
  1.以小吸管在微量測(cè)試孔中依次加入兩滴待測(cè)的樣品(以小吸管吸取時(shí),須將*滴滴除后,再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)步驟)。 
  2.充分搖勻氯霉素指示劑,以新的滴管吸取氯霉素指示劑,滴去前兩滴,加入一滴指示劑于待測(cè)樣品的測(cè)試孔。 
  3.以手輕輕握住微孔,貼著桌面震蕩使其混合均勻約5分鐘。 
  4.于每個(gè)測(cè)試孔中放入試紙片(白色端在下)。 
  5.靜置10分鐘后判讀結(jié)果(判讀結(jié)果時(shí)間不要超過(guò)20分鐘)。 
  D、判讀: 
  (由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋?zhuān)虼怂贸龅臉悠窛舛纫欢ㄒ俪艘云湎♂尡稊?shù)) 
  情形1—T線比C線深,或一樣深,表示樣品中氯霉素濃度低于3ppb。 
  情形2—T線比C線淡,表示樣品中氯霉素濃度高于3ppb。 
  情形3—若C線*沒(méi)出現(xiàn),則表示測(cè)試失敗。

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